保存：4℃保存。

产品说明： 

     金担子素 A（Aureobasidin A，AbA）是从丝状真菌 Aureobasidium pullulans No. R106 中 分离出来的环酯肽类抗生素，具有很强的抗真菌能力。在较低的浓度下（0.1-0.5μg/ml）即可 对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括：出牙酵母（Saccharomyces cerevisiae）、粟酒 裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光滑念珠菌（Candida glabrata）、构巢曲霉 （Aspergillus nidulans）和黑曲霉（A. niger.）。作用机制在于 AbA 抑制了真菌生长所依赖 的肌醇磷酰胺（inositol phosphorylceramide，IPC）合成酶的活性，干扰鞘脂合成，从而进一 步杀死菌株。编码 IPC 合成酶的基因研究较多的有来自酿酒酵母菌的 AUR1 基因，以及构 巢曲霉的 AURA 基因，两者具有同源性。通过对这些编码基因进行突变即可使得菌株对 AbA  产生抗性，如 AUR1-C 基因。

     AbA 非常适合用作阳性克隆子筛选用的药物选择性标记。AbA 抗性也是酵母单/双杂交研 究中理想的报告子。本品为溶于甲醇的 AbA 溶液，浓度为 1 mg/ml。具体的工作浓度取决于 宿主细胞的敏感度（见表 1.AbA 对各种酵母菌的最低抑菌浓度（MIC））。

产品性质： 

分子式（Formula）：C60H92N8O11 

分子量（Molecular weight）：1100 

纯度（Purity）：≥95% 

熔点（Melting point）：155-157℃ 

结构式（Structure）：

操作步骤（抗 AbA 的酵母转化系统）： 

1. 加入 0.5 ml 过夜培养的酵母到 50 ml YPD 培养基中（配方：1L 液体培养基含有 10g  yeast extract，20g polypeptone，20g D-glucose；固体培养基另外加入 2%琼脂）。 

2. 30℃培养约 6 小时，测定 OD660 为 1～2。使用二倍体时，测定 OD660 为 2～4。 

3. 1,000×g 离心 5 分钟。 

4. 用 10 ml Solution A（配方：100 mM Lithium acetate，10 mM Tris-HCl pH 7.5，1 mM EDTA） 悬浮沉淀，1,000×g 离心 5 分钟。 

5. 用 Solution A 重悬沉淀，直到 OD660 为 150。 

6. 在管内分取 100μl 细胞悬浮液，30℃培养 1 小时。 

7. 加入 5μg 载体（环状或线性 DNA）和 150μg Carrier DNA（已经过 100℃加热 10 分钟， 并迅速冷却）。 

   注意：pAUR101 需使用线性 DNA 进行转化。使用环状 DNA 会降低转化效率甚至转化不成 功。pAUR112 和 pAUR123 需使用完整的质粒 DNA 进行转化。

8. 加入 850 μl Solution B（配方：取 40 g Polyethylene Glycol 4000 溶于 100 ml Solution A  充分溶解，需要现用现配），轻轻混匀。 

9. 30℃培养 30 分钟后，42℃培养 15 分钟。 

10. 室温放置 10 分钟。 

11. 5,000 rpm 离心 1 分钟，用 5 ml YPD 培养基悬浮沉淀。 

12. 30℃培养 6 小时~过夜。 

13. 5,000~10,000 rpm 离心，用 1-10 ml 0.9% NaCl 悬浮沉淀。

14. 在 YPD 选择培养基平板（含有一定浓度的 AbA，依菌株类型而定）上接种 100 μl 细胞 悬液。30℃培养 3-4 天后转化完成。 

15. 挑取阳性转化子，和/或测定转化效率（以每微克质粒 DNA 转化的菌落数来表示）。

注意事项： 

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

2. AbA 的最佳工作浓度因宿主细胞不同而有差异，可根据最低抑菌浓度（MIC）来确定。